食物中的維生素含量介于納克到毫克之間，因此美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）強制要求對例如嬰兒配方奶粉等基質(zhì)中的維生素含量進(jìn)行標(biāo)記。維生素的化學(xué)多樣性使得我們難以對所有維生素同時進(jìn)行萃取和分析。為此，水溶性和脂溶性維生素的分析通常分開進(jìn)行，這就延長了分析時間。現(xiàn)在，我們要介紹一種降低維生素分析時間和成本的方法。

在我們的研究中，先采用了一種高靈敏度、可靠且用時大約 15 分鐘的方法，該方法采用紫外檢測技術(shù)了同時測定 9 種脂溶性維生素。在分離和定量操作中，我們采用的是配置安捷倫 Poroshell EC-C18 色譜柱的安捷倫 1260 Infinity 液相色譜系統(tǒng)。

隨后將論證如何將這種耗時的方法有效地轉(zhuǎn)換為一種省時（3.5 分鐘）的采用安捷倫 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)的超液相色譜（UHPLC）方法。當(dāng)我們迫切需要超快速分析時，這種大幅縮短時間的方法其益處顯而易見。

圖 1.采用 15 cm 安捷倫 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱對 9 種脂溶性維生素進(jìn)行 HPLC 分離。放大的內(nèi)插圖顯示了三種不同形式的維生素 A 的分離 （放大 圖片）

安捷倫 1260 Infinity 液相色譜系統(tǒng)可提供準(zhǔn)確的分析結(jié)果

我們采用安捷倫化學(xué)工作站 B.04.02 軟件控制的安捷倫 1260 Infinity 四元泵液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行本次研究。圖 1 展示了安捷倫 Poroshell 120 EC-C18 色譜柱（150 mm×3.0 mm，2.7 µm 粒度）在 13 分鐘內(nèi)對 9 種脂溶性維生素進(jìn)行了分離。

由于分子結(jié)構(gòu)的多樣性，因此zui大吸光度會因維生素的不同而不同。我們使用安捷倫化學(xué)工作站軟件的峰純度分析功能來檢查各個峰的純度并對方法的特異性作出評價。為了驗證該方法，我們對精度、線性范圍、準(zhǔn)確度、特異性、回收率和可靠性進(jìn)行了研究。有關(guān)液相色譜系統(tǒng)和成功驗證結(jié)果的詳細(xì)信息，請參閱安捷倫應(yīng)用報告 5990-8668EN.

營養(yǎng)成分的標(biāo)記：分析證明了方法的適用性

為了說明該方法能夠有效用于營養(yǎng)成分的標(biāo)記，我們對嬰兒配方奶粉和復(fù)合維生素片中的維生素 D 進(jìn)行定量分析，然后將所得結(jié)果與標(biāo)示值進(jìn)行比較。我們利用校準(zhǔn)曲線的方程進(jìn)行計算。采用回收率校正方法，計算得到的嬰兒配方奶粉和復(fù)合維生素片中維生素 D 的含量分別為 6.0 µg/100 g 和 12.0 µg/片，這些數(shù)值與標(biāo)示值非常接近。結(jié)果表明該方法非常適用于定量食品樣品中的維生素。

圖 2. 快速分析：采用 UHPLC 方法在安捷倫 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)上對 9 種脂溶性維生素進(jìn)行分離 （放大 圖片）

采用 UHPLC 方法進(jìn)行分析只需短短三分鐘

接著，我們開發(fā)了一種采用二極管陣列進(jìn)行檢測的 UHPLC 方法，能夠有效分離 9 種脂溶性維生素（見圖 2）。此方法采用了由安捷倫化學(xué)工作站 B.04.02 軟件控制的安捷倫 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)。有關(guān)系統(tǒng)和結(jié)果的詳細(xì)信息，請參閱安捷倫應(yīng)用摘要 5990-8668EN。與之前使用的 15 分鐘 HPLC 梯度方法相比，這種新的 UHPLC 方法可節(jié)約 66% 的分析時間和溶劑。

總的來說，使用這種 UHPLC 方法可獲得*的色譜分離度。雖然視黃醇和視黃酸會發(fā)生共洗脫，但這對維生素的分析不會造成問題，因為在給定的樣品基質(zhì)中，維生素 A 同時以醇（視黃醇）和酸（視黃酸）的形式存在的幾率很低。

峰面積和保留時間重現(xiàn)性的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值較低，這證實了所開發(fā)的 UHPLC 方法的可靠性和靈敏度。使用此方法能夠?qū)κ称窐悠愤M(jìn)行營養(yǎng)成分標(biāo)記快速分析。